化学发光是物质在发生化学反应时产生的一种光辐射现象,根据其特性,在生物学领域中常被用来进行蛋白质与DNA的检测。化学发光成像系统相较具有高灵敏度、无材料损耗、自动曝光过程、电子图片存档等众多优势,但是,由于系统是依靠HRP或AP等特定的酶与底物结合来运作,因此所产生的光辐射比较微弱,相应的光信号的采集过程难度就大了不少。所以,想要获取到如此微弱的化学发光,就需要配置性能较高的CCD相机。
衡量CCD性能高低的指标,有分辨率、灵敏度、信噪比、动态范围等,而凝胶成像系统就需要CCD具有以高分辨率、高灵敏度、低噪声、宽动态范围等为主要参数的基本特性。也就是说,想要通过化学发光成像系统获取清晰的图像并进行的分析的话,CCD在选择上一定要满足相关特性。
高分辨率是重要的特性要求,是指在一定单位时间内,所获取的像素数目。而像素数目又是判定CCD好坏的重要指标,指的是CCD可以分辨到的zui小感光元件,一般来说,像素越高,感光性越好,成像也就越清晰。但是,并不是像素数目多了,就一定是性能好的CCD,还要看像素的大小。这是因为如果大小不变,数目增多的话,其排列就会变得密集,那么像素之间就越容易出现电流干扰,产生电流噪点。
噪点的出现、噪声的干扰都会直接影响到图像的成像质量,有效的调节像素尺寸与数量的关系就是防止噪声出现的手段,因此,低噪声也是非常重要的特性要求之一。化学发光成像过程中的噪声主要有读出噪声与热噪声两种,对于读出噪声,就要求CCD在电路设计上多进行优化,而在热噪声的降低上,就对CCD的制冷有了一定的要求了。经实验发现,曝光超过5-10秒时,CCD芯片就会开始发热,如果芯片没有制冷设备,白色的像素点就会遮盖图像,图像成像后会出现雪花。凝胶成像系统需要曝光的时间比较长,对制冷的要求更加的严格,所以,制冷CCD相机可以说是包括化学发光在内的所有分子成像分系统的发展趋势。
除以上两点外,动态范围、灵敏度、量子效率等特性也是化学发光成像系统CCD所需要的,而且这些特性之间都存在某种直接或间接的关系,在这,就不过多的介绍了。
凝胶成像系统的组成
*部分:凝胶成像仪的控制系统
控制系统有三种规格:B型控制系统、T型控制系统和A型控制系统。控制系统的主要作用是控制凝胶图像系统的工作和运行。
第二部分:凝胶成像仪的光源系统
光源系统有三种规格:1)312nm紫外透射工作台;2)254nm紫外反射灯;3)365nm紫外反射灯。左右侧灯每个灯上分别装有一只254nm、365nm的紫外灯管,这样光从左右两侧发出,紫外光源的作用是:紫外光照射经EB染色的凝胶会发出明亮的荧光。不同波长的紫外光对不同染色的凝胶激发作用也不尽相同。
第三部分:凝胶成像仪的暗室
暗室的主要作用是:经紫外光激发的EB胶发出的荧光在暗室中更加明亮,便于摄像机抓拍。
第四部分:凝胶成像系统图像采集系统
图像采集主要由摄像机镜头及Bio-capt图像采集软件组成。摄像机的主要作用是抓拍发出荧光的凝胶图像。摄像机必须由高像素对弱光拍摄能力强科研及的相机。监控用的民用级及工业级摄像机用来对凝胶图像的抓拍均不清晰。 Bio-capt图像采集软件的作用是将摄像机抓拍摄下来的凝胶图像传输入计算机。
第五部分: 凝胶成像仪的Bio-1D分析软件
Bio-1D分析软件的主要作用是在计算机内对凝胶图像进行分子量、RF值等数据的分析。