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PCR基因扩增仪对样品的收集和扩增环节操作要求

2019-12-05 浏览次数:534

   PCR基因扩增仪是体外酶促合成特异DNA片段的一种方法,由高温变性、低温退火及适温延伸等几步反应组成一个周期,循环进行,使目的DNA得以迅速扩增,具有特异性强、灵敏度高、操作简便、省时等特点。
  PCR基因扩增仪检测微量感染因子时,操作人员容易因为污染而导致各种问题。SLD中检实验室技术根据多年行业经验,给出的建议是:进行PCR操作时,操作人员一定要严格遵守一些操作规程,大程度地降低可能出现的PCR污染事故的发生。 
  尽管PCR扩增序列的残留污染大部分是假阳性反应导致的,但样品间的交叉污染也是常见原因之一。因此,不仅要在进行扩增反应时要谨慎对待,在样品的收集、抽提和扩增的所有环节都应谨慎操作,一般需做到以下几点: 
  1、戴一次性手套,若不小心溅上反应液,应立即更换手套; 
  2、避免反应液飞溅,若不小心溅到手套或桌面上,应立刻更换手套并用稀酸擦拭桌面; 
  3、使用一次性吸头,严禁与PCR产物分析室的吸头混用,吸头不要长时间暴露于空气中,避免空气中气溶胶的污染; 
  4、操作多份样品时,制备反应混合液,先将dNTP、缓冲液、引物和酶混合好,然后再分装,这样既可以减少操作次数,避免污染,又可以增加反应的精确度; 
  5、最后加入反应模板,加入后盖紧反应管; 
  6、操作时设立空白对照和阴阳性对照,既可验证PCR反应的可靠性,又可
  以协助判断扩增系统的可信性; 
  7、由于实际操作时加样器很容易受产物气溶胶或标本DNA的污染,所以操作者应该使用高压处理过的或可替换的加样器。假如没有这种特殊的加样器,至少在PCR操作过程中加样器应该专用,严禁交叉使用,尤其是PCR产物分析所用加样器不能拿到其它两个相邻区域使用; 
  8、重复实验,验证结果,慎下结论。 
  由于PCR实验操作非常专业,在设计PCR基因扩增实验室时设计师也要充分考虑上述技术要求,避免PCR实验室在后续使用时出现返工、返修问题。

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